冷冻食品加工厂荧光定量PCR的行业须知「在线咨询」

广州劢博仪器有限公司产品服务包括：非洲病毒检测、核酸提取纯化、PCR、荧光定量PCR、检测、非洲检测、全自动核酸提取纯化系统、病毒核酸提取系统、非洲病毒快速检测***盒。我们的客户对象是食品企业/公司/厂、食品加工企业/公司/厂、冷冻食品加工企业/公司/厂、养殖场、养猪场、屠宰场、生猪屠宰场。PCR检测虽不需要荧光显微设备，但也需要相关设备，可以代替病毒分离鉴定的一种灵敏、特异、快速非瘟检测技术。

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一、在动物检疫中对生猪及其产品开展非洲病毒检测，应当使用我部批准或经中国动物疫病预防控制中心比对符合要求的检测方法及检测***盒（试纸条），确保检测结果准确。符合要求的检测方法及检测***盒（试纸条）可从中国动物疫病预防控制中心网站查询。二、应急期间，比对符合要求的检测***盒（试纸条）可使用至2019年6月30日。三、各地畜牧兽医管理部门要加强对非洲病毒检测***盒（试纸条）生产企业及其产品质量监管，确保产品质量符合要求。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。

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猪肉制品加工企业在生猪产品原料中检出非洲病毒核酸阳性的，应当立即封存阳性样品的同批次原料并报告所在地市场监管、畜牧兽医部门，并将阳性样品送至具有检测资质的单位复检。复检为阳性的，企业要在当地市场监管、畜牧兽医部门监督下，按规定对同批次生猪产品原料进行无害化处理，对相关场所进行彻i底清洗消毒。根据应对流行性腹泻病毒的经验，在不影响动物性能和饲料成本的情况下，替换原料的可行性使得很多生产者不再使用猪源原料。

广州劢博仪器有限公司产品服务包括：非洲病毒检测、核酸提取纯化、PCR、荧光定量PCR、检测、非洲检测、全自动核酸提取纯化系统、病毒核酸提取系统、非洲病毒快速检测***盒。我们的客户对象是食品企业/公司/厂、食品加工企业/公司/厂、冷冻食品加工企业/公司/厂、养殖场、养猪场、屠宰场、生猪屠宰场。此外，用real-timeQ-PCR来研究mRNA时，受到不同RNA样本存在不同的逆转录（RT）效率的限制。

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PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的，随着反应循环数的增加，终PCR反应不再以指数方式生成模板，从而进入平台期。在传统的PCR中，常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的终扩增产物，因此用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处。在real-time Q-PCR中，对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号，随着反应时间的进行，监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。（2）因为荧光素种类以及检测光源的局限性，从而相对地限制了real-timeQ-PCR的复合式（multiplex）检测的应用能力。

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在PCR反应早期，产生荧光的水平不能与背景明显地区别，而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期，因此可以在PCR反应处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量，并且由此来推断模板i初的含量。为了便于对所检测样本进行比较，在real-time Q-PCR反应的指数期，首先需设定一定荧光信号的域值，一般这个域值（threshold）是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号（baseline），荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。分子遗传学诊断技术多以遗传物质DNA为检测对象，不需要进行细胞培养，为传统的细胞染色体核型分析技术提供了有效的补充。

广州劢博仪器有限公司产品服务包括：非洲病毒检测、核酸提取纯化、PCR、荧光定量PCR、检测、非洲检测、全自动核酸提取纯化系统、病毒核酸提取系统、非洲病毒快速检测***盒。我们的客户对象是食品企业/公司/厂、食品加工企业/公司/厂、冷冻食品加工企业/公司/厂、养殖场、养猪场、屠宰场、生猪屠宰场。注意：这里说的时间，不单纯是消毒所用的时间，更重要的是病原体与消毒i药接触的有效时间。

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如果检测到荧光信号超过域值被认为是真正的信号，它可用于定义样本的域值循环数（Ct）。Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，因此只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。在反应体系中加入荧光分子，通过荧光信号的按比例增加来反应DNA量的增加，使PCR产物的实时检测成为可能。

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扩增序列特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的***特异寡核苷酸探针来检测产物，它又可分为直接法和间接法。间接的方法就是利用水解探针的策略。目前在real-time Q-PCR中广泛使用的TaqMan系统就是运用了这个原理。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团，此时5′端荧光基团吸收能量后将能量转移给临近的3′端荧光淬灭基团（发生荧光共振能量转移，FRET），因此探针完整时，检测不到该探针5′端荧光基团发出的荧光。广州劢博--屠宰场荧光定量PCR磁珠法核酸提取，具有传统DNA提取方法无法比拟的优势，主要体现在：①能够实现自动化、大批量操作，符合生物学高通量的操作要求，使得传i染性***爆发时能够进行快速及时的应对，这一特点使得传统方法望尘莫及。