博日养猪场荧光定量PCR常用指南

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猪肉制品加工企业、生猪产品经营者采购生猪产品应当批批查验其动物检疫合格证明、肉品品质检验合格证明以及非洲***病毒检测结果（报告），确保购进的生猪产品不带非洲***病毒；采购的进口生猪产品应附有合法的入境货物检验检疫合格证明。96孔板比较方便，加完样品后只需附上一层膜，用它自带的板子抚平即可。不得采购没有非洲***病毒检测结果（报告）及未经检疫或者检疫不合格的生猪产品，确保猪肉制品和经营的生猪产品不含非洲***病毒。

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所谓real-time Q-PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，***后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在real-time 技术的发展过程中，两个重要的发现起着关键的作用：（1）在90年代早期，Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的发现，它能降解特异性荧光记探针，因此使得间接的检测PCR产物成为可能。根据其使用范围可以分为两类，一种是大型核酸提取仪，另一种是小型核酸提取仪。（2）此后荧光双标记探针的运用使在一密闭的反应管中能实时地监测反应全过程。这两个发现的结合以及相应的仪器和***的商品化发展导致real-time Q-PCR方法在研究工作中的运用。

广州劢博仪器有限公司产品服务包括：非洲***病毒检测、核酸提取纯化、PCR、荧光定量PCR、***检测、非洲***检测、全自动核酸提取纯化系统、病毒核酸提取系统、非洲***病毒快速检测***盒。SYBR仅与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。我们的客户对象是食品企业/公司/厂、食品加工企业/公司/厂、冷冻食品加工企业/公司/厂、养殖场、养猪场、屠宰场、生猪屠宰场。

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在real-time Q-PCR技术中，无论是相对定量还是标准曲线定量方法仍存在一些PCR定量方法均有的问题有待解决。在标准曲线定量中，标准品的制备是一个必不可少的过程。广州劢博--博日病毒核酸提取系统在PCR扩增中，溶液中的模板变性后低温退火时，引物与探针同时与模板结合。目前由于无一统一标准，各个实验室所用的生成标准曲线的样品各不相同，致使实验结果缺乏可比性。此外，用real-time Q-PCR来研究mRNA时，受到不同RNA样本存在不同的逆转录（RT）效率的限制。在相对定量中，其前提是假设内源控制物不受实验条件的影响的，合理地选择合适的不受实验条件影响的内源控制物也是实验结果可靠与否的关键。

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与传统的PCR技术相比，Real-time Q-PCR的不足之处是：（1）由于运用了封闭的检测，减少了扩增后电泳的检测步骤，因此也就不能监测扩增产物的大小；（2）因为荧光素种类以及检测光源的局限性，从而相对地限制了real-time Q-PCR的复合式（multiplex）检测的应用能力；（3）目前real-time Q-PCR实验成本比较高，从而也限制了其广泛的应用。猪场一线需要快速检测技术以尽早确诊，做到早处理、早隔离，但要明确的是，猪场只需要通过合适的检测工具，帮助“定性”即可，不需要深入定量分析，有问题直接捕杀无害化处理。

广州劢博仪器有限公司产品服务包括：非洲***病毒检测、核酸提取纯化、PCR、荧光定量PCR、***检测、非洲***检测、全自动核酸提取纯化系统、病毒核酸提取系统、非洲***病毒快速检测***盒。广州劢博--食品加工企业/公司/厂PCR如果检测到荧光信号超过域值被认为是真正的信号，它可用于定义样本的域值循环数（Ct）。我们的客户对象是食品企业/公司/厂、食品加工企业/公司/厂、冷冻食品加工企业/公司/厂、养殖场、养猪场、屠宰场、生猪屠宰场。

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根据动物防疫法及其配套规章规定，县级动物卫生监督机构依法向屠宰场派驻(出)官i方兽医实施屠宰检疫。广州劢博--养殖场核酸提取纯化传统的PCR定量是应用终点PCR来对样品中的模板量进行定量,通常用凝胶电泳分离,并用荧光染色来检测PCR反应的***终扩增产物。按照生猪屠宰检疫规程和相关规定，屠宰检疫内容包括传i染病和寄i生虫病，检疫流程包括生猪进入屠宰厂(场、点)监督查验、检疫申报、宰前检查、同步检疫、检疫结果处理以及检疫记录等。在非洲***防控期间，官i方兽医监督屠宰企业开展非洲***自检，对没有开展自检的屠宰企业，对屠宰后的生猪产品一律不得出具动物检疫证明。

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实时荧光定量PCR(real-time quantitativePCR)/QRT-PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光标记物，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，***后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。上机器前***i好离心一下，让贴在管壁上的液体流下来同时也消掉气泡。一般用于mRNA转录水平的定量研究、不同样本或***组中DNA拷贝数的测定、***芯片结果验证、药i效分析等。金开瑞采用SYBR荧光染料法及TaqMan探针法进行荧光定量PCR检测，从引物设计到检测一次性完成，提供2种常用的内参引物及免费的***数据分析，每个样品设置至少三个平行对照，保证结果的准确可靠。