食品厂非洲猪瘟病毒检测承诺守信,广州劢博公司

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据介绍，该发明公开了一种非洲猪瘟病毒 CP530R 基因的荧光 PCR 检测试剂及其制备方法与用途，设计合成了一套特异性的引物及 Taqman 探针和阳性对照，并利用该引物及探针建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高的荧光 PCR 检测体系，可在 3～4 小时内从被检样本中快速、准确、特异、安全、简便地检出 ASFV CP530R 基因，可用于来自家猪、野猪和软蜱的各种样本中微量非洲猪瘟病毒CP530R 基因的检测。广州劢博--博日养猪场全自动核酸提取纯化系统实时荧光定量PCR的基本原理：理论上，PCR过程是按照2n（n代表PCR循环的次数）指数的方式进行模板的扩增。

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非洲猪瘟 ( ASF ) 是由非洲猪瘟病毒 ( ASFV ) 引起猪的一种急性、热性、高度接触性传i染病。只有在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。从 20 世纪 60 和 70 年代i开始 ASF 由非洲蔓延至欧美地区，2007 年格鲁吉亚、亚美尼亚、阿塞拜疆和俄罗斯都出现了大面积流行，2018年8月也开始在我国快速蔓延开来，对我国养猪业的持续稳定发展构成巨大威胁。因此，本方法为快速诊断非洲猪瘟病毒，提供了有力的技术手段。

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在PCR扩增中，溶液中的模板变性后低温退火时，引物与探针同时与模板结合。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，因此只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。在引物的介导下，沿模板向前延伸至探针结合处，发生链的置换，Taq酶的5′-3′外切酶活性（此活性是双链特异性的，游离的单链探针不受影响）将探针5′端连接的荧光基团从探针上切割下来，游离于反应体系中，从而脱离3′端荧光淬灭基团的屏蔽，接受光刺激发出荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

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直接的方法指的是标记荧光的探针与扩增产物结合后即直接产生荧光，分子信标（molecular beacon）就属于这一类，它本质上是一种标记荧光的发夹探针，当探针分子呈发夹结构时，结合在其两端的荧光基团距离上接近，使得产生能量转移效应，而不发生荧光。广州劢博--生猪屠宰场PCR荧光定量PCR最早称TaqManPCR，后来也叫Real-TimePCR，是美国PE（PerkinElmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。当互补序列出现时，探针与DNA杂交，探针转变成一个开放的结构，呈线性，报告荧光基团与淬灭荧光基团彼此在空间上产生足够的分离，荧光基团脱离了淬灭基团的影响，从而产生可被检测到的荧光。

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定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术，即实时定量PCR。屠宰厂(场)生产设施设备和环境一旦被污染，病毒更易长期存活，更易在生猪和猪肉产品中循环扩增，成为病毒的“储存器”“扩增器”。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。

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PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。在real-timeQ-PCR中，对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号，随着反应时间的进行，监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步.